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将序列粘贴到序列框中，同理更改名字以及添加酶切位点序列（下游酶切位点是BamHI）和保护碱基的序列，然后点击“addprimertotemplate”-生命科学软件点击“Map”，Ctrl键选择两个引物（如图），点击“Action”→“PCR”点击“PCR”，即获得扩增产物-生命科学软件打开表达载体序列，按Ctrl键选择两个酶切位点（蓝色标记的），点击“Action”→“Restrictioncloning”→“Insertfragment”点击“Insert”，选择刚刚扩增产物的文件“Amplified.dna”，然后分别输入相应内切酶的名字，点击插入的片段。在右下角点击“Clone”即可。湖南定制化生命科学软件是什么有什么好的生物学软件推荐。

与参考序列比对-生命科学软件使用功能强大的对齐工具检查实际结构是否与模拟结构匹配。映射概述查看比对序列与参考序列匹配的地方以及存在差异的概述。序列详细信息自动记录-生命科学软件SnapGene自动记录操作以创建图形历史记录，并将原型构造在文件中。***的“撤销”功能撤销几何操作。不要为尝试SnapGene文件而感到害羞—重复步骤很容易。历史和原型查看构造的图形历史记录单击操作以突出显示亲本和产物序列的相关部分，或单击PCR引物名称以查看引物序列。

得到的结果如下图所示。下图中显示的酶是能够切断目的基因的酶，因此要排除。所以我们剩下的可以选择的酶包括Nde1,EcoR1,Pst1共3种酶。下一步打开载体DNA文件。-生命科学软件打开载体以pGADT7AD为例，查看切入位点的酶有哪些。在筛选的过程中还要注意酶切位点不能把基因切断。因此在选择酶切位点时候要保证两点。1.载体中多克隆位点中包含该限制性内切酶。2.目标基因可酶切的位置不包含该限制性内切酶。点击图中标记的地方MCS（多克隆位点）插入基因的位置。-生命科学软件。适用于生命科学行业的控制系统和软件。

在该序列5’端上添加数个碱基作为保护碱基。点击完成。-生命科学软件△下游引物设计相同，不再赘述。2.突变引物绘制：在目的基因上截取一小段包含要突变位点的序列，点击Primers→Addprimers，为该引物命名，在5’序列突变位点的三个碱基画黑，点击Insertions，选择突变成的氨基酸，点击Insert。即可获得该突变引物，点击ReverseComplement，可获得反向引物。-生命科学软件模拟标准限制性克隆1.打开**入片段的质粒图谱，选择合适的两个酶切位点，如HindIII和ApaI。生命科学不容错过的App。湖北定制化生命科学软件试用

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